The assay time is considerably reduced from about an hour to few minutes by the newly reported RTF-EXPAR method which uses reverse transcriptase-free (RTF) approach for conversion of RNA σε DNA followed by EXPAR (Exponential Amplification Reaction) for amplification at single temperature.
Controlling the rate of Covid-19 spread requires an accurate and a faster virus testing strategy. RT-PCR (reverse transcriptase polymerase chain reaction), the most accurate testing method being currently employed is a two-step test that takes around 60 minutes per sample.
Οι ερευνητές από το Πανεπιστήμιο του Μπέρμιγχαμ ανέφεραν μια νέα μέθοδο για την ανίχνευση του SARS-CoV-2. Αυτό θα μπορούσε να επιτρέψει πολύ πιο γρήγορη δοκιμή και είναι αρκετά ευαίσθητο.
Η ανίχνευση ιικού RNA από RT-PCR (αλυσωτή αντίδραση πολυμεράσης αντίστροφης μεταγραφάσης) περιλαμβάνει μετατροπή ιικού RNA σε συμπληρωματικό DNA (cDNA) που ακολουθείται από ενίσχυση του cDNA με ποσοτική PCR (qPCR). Το cDNA στη συνέχεια ανιχνεύεται χρησιμοποιώντας μια φθορίζουσα βαφή. Αυτό διαρκεί έως και μία ώρα.
The assay time is considerably reduced from about an hour to few minutes by the newly reported RTF-EXPAR method which uses reverse transcriptase-free (RTF) approach for conversion of RNA into DNA followed by EXPAR (Exponential Amplification Reaction) for amplification at single temperature. The amplification taking place at a single temperature is the key to speed, because it avoids lengthy heating and cooling steps of RT-PCR. Further, the section of DNA being amplified is smaller compared RT-PCR. Hence, EXPAR generates up to 108 strands of DNA product in few minutes. The duplex formation is monitored, as in RT-PCR method using fluorescent dye, SYBR Green.
Είναι ενδιαφέρον ότι η νέα μέθοδος μπορεί να τροποποιηθεί για να ανιχνεύσει πολλές άλλες μολυσματικές ασθένειες που προκαλούνται από ιούς RNA, για παράδειγμα Έμπολα, RSV κ.λπ.
Πηγές):
Carter et al (2020). Ανίχνευση RNA του SARS-CoV-5 υπό 2 λεπτά με χρήση Αντίδρασης Εκθετικής Ενίσχυσης Χωρίς Αντίστροφη Μεταγραφάση, RTF-EXPAR. Προεκτύπωση. Δημοσιεύθηκε στο medRxiv Δημοσιεύτηκε στις 04 Ιανουαρίου 2021. DOI: https://doi.org/10.1101/2020.12.31.20248236
***
